Pokyny pre rozmrazovanie buniek
- Rýchlo rozmrazte zmrazené bunky (< 1 minúta) vo vodnom kúpeli s teplotou 37 °C.
- Rozmrazené bunky pred inkubáciou pomaly zrieďte pomocou predhriateho rastového média.
- Rozmrazené bunky naneste na platňu s vysokou hustotou, aby ste optimalizovali regeneráciu.
- Vždy používajte správnu aseptickú techniku a pracujte v digestore s laminárnym prúdením.
Prečo sa rozmrazovanie buniek robí?
Je dôležité správne rozmraziť bunky, aby sa zachovala životaschopnosť kultúry a aby sa kultúra mohla rýchlejšie zotaviť. Niektoré kryoprotektanty, ako je DMSO, sú toxické nad 4 °C. Preto je nevyhnutné, aby sa kultúry rýchlo rozmrazili a zriedili v kultivačnom médiu, aby sa minimalizovali toxické účinky.
Aký je proces rozmrazovania?
Rozmrazovanie je proces preberania mrazeného produktu z mrazeného produktu na teplotu (zvyčajne nad 0°C), pri ktorej nezostáva žiadny zvyškový ľad, t. j. „rozmrazovanie“. Rozmrazovanie sa často považuje len za zvrátenie procesu zmrazovania.
Aký je najlepší spôsob zmrazenia buniek?
Zmrazujte bunky pomaly znížením teploty na približne 1 °C za minútu pomocou kryo-mrazničky s riadenou rýchlosťou alebo kryo-mraziacej nádoby, ako napríklad „Mr. Frosty, “dostupné od Thermo Scientific Nalgene labware (Nalge Nunc). Vždy používajte odporúčané mraziace médium.
Ako rozmrazíte primárnu bunku?
Utrite vonkajšiu časť liekovky s bunkami 70% etanolom alebo izopropanolom. V biologickej bezpečnostnej skrini otočte uzáver o štvrť otáčky, aby ste uvoľnili vnútorný tlak, a potom ho znova utiahnite. Rýchlo rozmrazte bunky vo vodnom kúpeli s teplotou 37°C jemným krúžením injekčnej liekovky. Keď zostane malé množstvo ľadu, vyberte injekčnú liekovku.
