Nasleduje prehľad rôznych krokov protokolu nepriameho imunofluorescenčného farbenia
- Plánovanie experimentov a príprava vzoriek. …
- Upevnenie vzorky. …
- Permeabilizácia buniek. …
- Blokovanie. …
- Inkubácia primárnych protilátok. …
- Inkubácia sekundárnej protilátky. …
- Zarážka a montáž.
Ako vykonávate imunofluorescenciu?
Všetky inkubačné kroky prebiehajú pri izbovej teplote
- Dvakrát umyte bunky a pomocou pinzety opatrne vložte krycie sklíčko s bunkami otočenými hore do zvlhčovanej komory.
- Zafixujte 4 % formaldehydom na 10 minút a umyte 3×.
- Permeabilizujte 0,1 % TX-100/PBS na 15–20 minút a umyte 3×.
Ako používate imunofluorescenciu v bunke?
Imunofluorescenčný protokol pre adherentné bunky
- Nasaďte 1–1,5 x 104 buniek na jamku 4-komorového podložného sklíčka v 500 ml kultivačného média. Inkubujte pri 37 °C a 5 % CO2.
- 32–36 hodín po vysiatí buniek odstráňte kultivačné médium a bunky 3-krát opláchnite 500 µl 1X PBS.
Aký je príklad imunofluorescencie?
Výskumník môže napríklad vytvoriť primárne protilátky u kozy, ktoré rozpoznávajú niekoľko antigénov, a potom použiť farbivo spojené králičie sekundárne protilátky, ktoré rozpoznávajú konštantnú oblasť kozej protilátky („ králičie anti-kozie protilátky).
Aké je použitie imunofluorescenčného farbenia?
Imunofluorescenčné (IF) farbenie je široko používaná technika v biologickom výskume a klinickej diagnostike IF využíva fluorescenčne značené protilátky na detekciu špecifických cieľových antigénov. Nasleduje zobrazovanie, je to veľmi priama technika, pretože niečo skutočne vidíte.
