Na zníženie väzby nešpecifickej protilátky a v dôsledku toho na zníženie signálu pozadia sa odporúča použiť blokovací roztok pred inkubáciou s protilátkami Najúčinnejší blokovací roztok bude byť to, ktoré obsahuje sérum z rovnakého druhu, v ktorom bola vytvorená sekundárna protilátka.
Ako predchádzate škvrnám na pozadí?
Zmenšenie hrúbky častí tkaniva môže pomôcť znížiť zafarbenie pozadia. Skúste rezať tenšie časti pre čistejšie IHC. Je tiež dôležité dávať pozor, aby časti nevyschli, pretože sušenie môže viesť k vysokému nešpecifickému zafarbeniu.
Ako optimalizujete imunofluorescenciu?
Imunofluorescenčná mikroskopia: 10 technických tipov na úspech
- Fixácia a permeabilizácia buniek. …
- Špecifickosť protilátok. …
- Použitie vhodného riedenia protilátky. …
- Optimalizácia vyrovnávacích pamätí a blokovacích agentov. …
- Použitie vhodnej bunkovej hustoty. …
- Viacnásobné farbenie. …
- Sekundárne protilátky. …
- Zmenšenie pozadia.
Čo spôsobuje škvrny na pozadí?
Sfarbenie pozadia môže byť spôsobené nevhodnou väzbou protilátky alebo chybami počas prípravy podložného sklíčka.
Znižujú sekundárne protilátky signály pozadia?
F(ab) špecifické sekundárne protilátky môžu pomôcť znížiť signál pozadia tým, že eliminujú nešpecifickú väzbu proteínov IgG nachádzajúcich sa v tkanivách sekundárnou protilátkou.
