Aby bolo možné extrahovať pigmenty z chloroplastov sú suspendované v izolačnom pufri. Aby sme mohli extrahovať pigmenty z chloroplastov, musíme sa najskôr zbaviť pufra. Aký je najlepší spôsob oddelenia chloroplastov od pufra? použite odstredivku na oddelenie
Ako izolujete chloroplast?
Pri metóde izolácie chloroplastov sa bunková stena rozbije mechanicky pomocou mixéra alebo homogenizátora. Potom sa neporušené pletivo listov a bunkové zvyšky odstránia filtráciou. Chloroplasty sa zbierajú centrifugáciou s použitím gradientu percoll.
Ako vyrobíte chloroplastový izolačný pufor?
Pripravte požadované množstvo 1X chloroplastového izolačného pufra zriedením 2X tlmivého roztoku v pomere 1:1 s dH2O vodou Pridajte 10 µl 10% roztoku BSA na ml 1X chloroplastu Izolačný Buffer. Tesne pred použitím pridajte 1 µl DTT na 1 ml chloroplastového izolačného pufra. Označte túto vyrovnávaciu pamäť ako 'Complete Buffer'.
Čo je v chloroplastovom izolačnom pufri?
DNA izolačný pufor pozostával z 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8,0), 50 mM EDTA a 1 mM DTT Lýza chloroplastov sa získala inkubáciou chloroplastová peleta s 8 ml DNA izolačného pufra, 1,5 ml 20% SDS, 20 µl 2-merkaptoetanolu a 30 µl Proteinázy K (10 mg/ml) do centrifugačnej skúmavky pri teplote 55 °C počas 4 hodín.
Aké je pH tlmivého roztoku použitého na homogenizáciu listov špenátu v protokole izolácie chloroplastov?
Špenát je plný dobrých chloroplastov a ľahko sa izolujú. Listy budete musieť vložiť do studeného mixéra s 0,1 M fosfátovým pufrom, pH 7.5 a 0,5 M sacharózou, aby nepraskli.
