Test bimolekulovej fluorescenčnej komplementácie (BiFC) je metóda používaná na priamu vizualizáciu interakcie proteín-proteín in vivo pomocou zobrazovania živých buniek alebo fixovaných buniek. … BiFC prvýkrát opísali Hu et al.
Ako funguje komplementácia bimolekulárnej fluorescencie?
Princíp činnosti BiFC je založený na vývoji fluorescenčného komplexu, ktorý je výsledkom spojenia dvoch segmentov fluorescenčného proteínu, keď sú v tesnej blízkosti v dôsledku interakcie proteín-proteín vo fragmentoch, t.j., v BiFC je fluorofór rozdelený na amino a karboxylové koncové konce.
Čo je test BiFC?
test bimolekulárnej fluorescenčnej komplementácie (BiFC) umožňuje jednoduchú a priamu vizualizáciu proteínových interakcií v živých bunkách (45). Prístup BiFC je založený na tvorbe fluorescenčného komplexu, keď dva proteíny fúzované k nefluorescenčným fragmentom fluorescenčného proteínu navzájom interagujú (obr.
Prečo sa test BiFC robí?
Myšlienka BiFC je vyjadrovať polovice GFP fúzované s proteínmi, o ktoré máte záujem Ak sa body záujmu vzájomne ovplyvňujú, môžete spojiť obe polovice a získať funkčný GFP. Takže ak je v bunke exprimovaná jedna polovica GFP, neprekvapuje ma, že ju dokáže detekovať protilátka GFP.
Je BiFC reverzibilné?
Ireverzibilita komplexov BiFC bola dobre zdokumentovaná (10) a zdá sa, že väčšina, ak nie všetky, systémy BiFC na báze fluorescenčných proteínov sú nezvratné (8, 33, 43, 48 – 51).
